上海安亭科学仪器厂

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上海安亭离心机应用在大鼠血浆分析中

导读:文中介绍的实验采用荧光分光光度法测定大鼠血浆中的Dox及CS- Dox,建立了一种快速、简便、灵敏的定量测定大鼠血浆中Dox及CS-Dox含量的方法。上海安亭科学仪器厂介绍如下。


返回列表 来源:未知 发布日期:2019-08-14 16:46【
1、上海安亭科学仪器厂介绍本次实验需要的材料与仪器
猪CS111014-01( Mw=17.5kDa,华懋双汇实业( 集团) 有限公司生物化学制药厂) ;低分子量猪( Mw=4.1kDa,自制) ;Dox.HCl( 97% ,北京偶合试剂有限公司) ,CS-Dox( 自制) ,乙二胺四乙酸二钠( 分析纯,国药试剂有限公司) 。其他试剂均为国产分析纯。
实验仪器:上海安亭科学仪器厂TDL-40B台式低速离心机,Cary Eclipse荧光分光光度计( 美国Varian公司) ,TF-FD-1冷冻干燥机( 上海田枫实业有限公司) ,VortexQL-902涡旋仪( 江苏海门其林贝尔仪器制造有限公司) 。
实验动物:SD 大鼠( 雄性,200 ± 20 g) ,购买于济南朋悦实验动物繁育有限公司。

2 、上海安亭离心机分析大鼠血浆的实验方法
检测条件的选择:选用荧光分光光度法测量血浆中Dox的含量。 Ex480nm,Em500-800nm扫描,可以得到在Em593nm处有较高峰,故本实验检测条件选用Ex480nm,Em593nm,激发与发射狭缝均设定为10nm。
空白血浆样品的采集:实验前SD大鼠禁食不禁水12h,实验大鼠乙醚麻醉,眼内眦取血,采集的空白血液标本放入到上海安亭科学仪器厂装有EDTA二钠的离心管中,置于上海安亭TDL-40B台式低速离心机中以3000r/min离心10min,取上清,即得空白血浆样品。

Dox溶液的配制:精密称取 Dox·HCl 1.25mg加水定容到25ml的容量瓶中,配制50μg/ml的Dox溶液作为储备液。精密吸取储备液( 0.04ml、0.10ml、0.20ml、 0.40ml、1.00ml、2.00 ml、4.00 ml、6.00ml) 放入10ml容量瓶中加水定容,配制相应浓度( 0.2μg /ml、 0.5μg/ml、1、2μg/ml、5μg/ml、10μg/ml、20μg/ml、30μg/ml) 的Dox溶液,4℃避光保存待用。
Dox标准曲线的绘制:精密吸取8份大鼠空白血浆 200μl放入上海安亭科学仪器厂生产的离心机需用的1.5ml离心管中,每个离心管中分别加入不同浓度的盐Dox溶液200μl,涡旋混匀,使得血浆中Dox的浓度分别为0.1μg/ml、0.25μg/ml、0.50μg /ml、1.00μg /ml。在检测条件下测定荧光强度值。以溶液浓度为横坐标,最终荧光强度值( Y)为纵坐标,绘出其荧光标准曲线并求得工作曲线的回归方程。
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