文中,上海安亭科学仪器厂介绍了本厂生产的TGL-20bR高速冷冻离心机在肿瘤细胞检测实验中的应用,先介绍肿瘤细胞检测实验所需要用到的仪器试剂,在简单介绍方法。上海安亭TGL-20bR高速冷冻离心机是最高转速能到2万转每分钟的离心机,可运用在各行各业。
1、先介绍实验试剂与仪器
实验试剂: 水溶性量子点购于北京北达聚邦科技有限公司;荧光染料,购于南京拜恩特斯生物科技有限公司。实验所用溶剂不作特殊说明均用蒸馏水。培养基购自( 美国,纽约) 公司,胎牛血清购于四季青公司,胰蛋白购于 HyClone( USA) 公司;青链霉素购自 Solarbio( 中国,北京) 公司,MTT试剂购自Solarbio( 中国,北京) 公司,二甲基亚砜( DMSO) 购自 Solar-bio( 中国,北京) 公司。
实验仪器: 高精度电子天平,磁力搅拌器加热台,超声清洗器,恒温水浴箱,移液枪,透射电子显微镜,光致荧光光谱仪( 蔚海光学仪器上海有限公司) ,紫外 —可见光吸收光谱仪( 上海精密仪器仪表有限公司) ,傅里叶光谱仪( 德国布鲁克光谱仪器公司) ,荧光倒置显微镜( DMi8,Leica,德国) ,多功能酶标仪 SYNERGY -H4( 美国 Biotek) ,细胞恒温培养箱水套CO2培养箱( 上海一恒科学仪器有限公司产品) ,TGL-20bR台式冷冻离心机( 上海安亭科学仪器厂生产) 。
2、实验方法
肿瘤细胞检测体系的构建: 将 CdSe/ZnS 量子点溶液和Cy3荧光染料按照摩尔比例为 1:0,1:0.28,1:0.4,1:0.52,1∶0.76,1∶ 0.88,1∶ 1.2 和 1∶ 1.4 混合加入反应样品瓶中,在常温、常压条件下搅拌5min,对混合溶液进行荧光测定。荧光光谱测定:在室温条件下,依次取0.1ml量子点溶液与染料构建体系溶液,反之依次取0.1 mL 染料溶液与量子点溶液构建 体系溶液,以365nm为激发波长,扫描精度为0.79nm的Ocean Optics QED65000型荧光光谱仪进行测试,记录200~1100nm波长范围内的发射光谱变化。傅里叶红外光谱测定: 常温下将CdSe/ZnS 量子点溶液,y3 荧光染料和 体系溶液滴在云母片上,80℃下真空烘干24h备用。分别将 3 种待测样品置于傅里叶红外显微镜光谱仪下进行测量,获得 3 种样品数据。前列腺癌细胞荧光成像: 将实验中需要使用的前列腺癌细胞分种在 6 孔培养板中。实验前需要将前列腺癌细胞培养24h,细胞传代密度达到60%~70%即可。量取配制好的 体系溶液10μL对前列腺癌细胞进行染色( pH =7. 3) ,摇匀后在37 ℃,5%CO2环境中培5min,移去培养液,用 PBS清洗3遍,在荧光倒置显微镜下观察其细胞形态并进行荧光成像研究。
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