高速离心机在温度对提取RNA研究中应用

导读:核糖核酸（RNA）是部分生物和病毒的遗传物质，在许多实验中，RNA的质量对实验结果有着决定性的影响。本研究上海安亭科学仪器厂采用TRIzol法在不同温度下提取鸡的总RNA，为探究不同

来源：未知发布日期：2020-01-08 11:05【大中小】

在动物组织中进行RNA提取是分子生物学中的基础实验技术，而提取RNA的质量将直接影响cDNA文库的构建、基因克隆、基因表达分析和功能基因筛选等后续结果的可靠性。在提取RNA的过程中RNA的质量受到多个因素的影响，温度是制约提取RNA质量的重要因素。本实验上海安亭科学仪器厂采用TRIzol法在不同温度（2℃、4℃和8℃）条件下提取鸡肉RNA，探究不同提取温度对RNA质量的影响。

将鸡进行解剖，将各个组织切割成一定大小后放入研钵中，再加入液氮研磨至粉状，采集研磨好的冷冻组织到离心管，然后迅速加入1mlBiozolReagent,漩涡充分震荡30s。保证所有的凝块全部溶解。冰上静置5min，再用2℃（上海安亭高速冷冻离心机）/4℃（上海安亭高速冷冻离心机）/8℃（上海安亭高速冷冻离心机），12000rpm离心10min，除去上层油脂，吸取中间层匀浆液转移至新的离心管中。在离心管中加入1/5体积的氯仿。盖好盖，漩涡剧烈震荡15s，冰上静置10min。2℃（上海安亭高速冷冻离心机）/4℃（上海安亭高速冷冻离心机）/8℃（高速冷冻离心机），12000rpm离心15min。溶液分为酚氯仿相、中间相和上层水相。RNA溶解在水相中。

转移不超过80%的水相到一个干净的离心管，然后加入等体积的异丙醇，漩涡充分震荡15s，在冰上静置15min。2℃（上海安亭高速冷冻离心机）/4℃（高速冷冻离心机）/8℃（高速冷冻离心机），12000rpm离心10min，离心后试管底部将出现沉淀。RNA沉淀的清洗：沿管壁轻轻加入1ml75%的乙醇，用手轻轻震荡离心管洗涤沉淀。在2℃（上海安亭高速冷冻离心机）/4℃（高速冷冻离心机）/8℃（高速冷冻离心机），8000rpm离心5min，弃上清，尽量去除残留乙醇，这样可以减少盐离子污染。

RNA沉淀的清洗：沿管壁轻轻加入1ml75%的乙醇，用手轻轻震荡离心管洗涤沉淀。7500rpm离心5min，弃上清，尽量去除残留乙醇，减少盐离子污染。RNA的溶解：室温晾干或真空干燥，然后加入30~50μlDEPC水溶解RNA，枪头吸打几次，待沉淀完全溶解。将RNA成品分成几份，放置于-80℃低温冰箱中做长期保存。

本实验上海安亭科学仪器厂结果表明，8℃条件下提取的RNA条带清晰完整，且无拖带现象出现，而4℃条件下提取的RNA有明显拖带现象，2℃条件下提取的RNA已降解。这可能是由于Trizol试剂中的苯酚被氧化后的产物使DNA双链相交联。温度过低，让组织细胞释放的内源核酸酶活性较低，无法将残留的DNA降解，而8℃条件下的内源核酸酶能较好的除去残留DNA，从而得到高品质的RNA。并且紫外分光光度计的结果也验证了这一结论。综上所述，在8℃条件下提取出的RNA的质量较高。

关于不同温度对RNA提取质量的影响，本文上海安亭科学仪器厂就解析到这里，内容仅供参考，欢迎大家到上海安亭科学仪器厂咨询购买相关产品。

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高速离心机在温度对提取RNA研究中应用

导读:核糖核酸（RNA）是部分生物和病毒的遗传物质，在许多实验中，RNA的质量对实验结果有着决定性的影响。本研究上海安亭科学仪器厂采用TRIzol法在不同温度下提取鸡的总RNA，为探究不同

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