上海安亭科学仪器厂在本文中介绍离心机在五苓散同方汤剂缺失化学成分药效的研究中的应用，文中先从本次实验所需要的实验材料仪器出发，并简单介绍下实验方法，阐明五苓方小剂量散剂临床疗效远强于其大剂量汤剂即五苓方宜散不宜汤的物质基础，对五苓方临床应用的剂型选择提供实验依据。
1、实验材料
实验动物：大鼠，SPF 级，体重 180 ~ 200 g，雄性，56 只，由辽宁长生生物技术有限公司提供，实验动物生产许可证号 ：SCXK（辽）2015-0001，合格证编号 ：211002300010439，标准饲养条件，温度：28 ~ 30 ℃ ,相对湿度 ：（55±5）%，光照 ：12 h /d。
2、所需要仪器设备
23- 乙酰泽泻醇 B（111846-201203）、香豆素（111739-200501）、 麦 角 甾 醇（111846-201203）均购自中国食品药品检定研究院 ；氢氯噻嗪（简称HCT， CAS 号 ：58-93-5，SIGMA-ALDRICH），AQP1（PB0498）、AQP2 （BA0649）、AQP4 （PB0500） 抗体及羊抗兔抗体（KGAA35）均购自博士德生物技术有限公司 ；全蛋白提取试剂盒（中国 江苏凯基生物科技发展有限公司 KGP250）；SDP-PAGE 凝胶电泳试剂盒（中国 江苏凯基生物科技发展有限公 司 KGP113），Western Blotting 检 测 试 剂 盒（ 中国 江苏凯基生物科技发展有限公司 KGP1201）；ECL 检测试剂盒（中国江苏凯基生物科技发展有限 公 司 KGP1123）；Trizol（ 美 国 Invirrogen 15596-026）；cDNA 第一链合成试剂盒（美国 Thermo FisherK1622）等。Real time PCR Master Mix （日本 TOYOBO）；高速冷冻离心机（上海安亭科学仪器厂TGL-20bR）；酶标仪（美国BioTek EL-x800）；荧光定量 PCR 循环仪（美国 ABIStep one plus Real time-PCR system）；分析天平（德国 Sartorius BL310/BL21S）等。
3、实验方法
将筛选合格的48只大鼠，分为6组，每组8只。正常大鼠的盐水负荷模型参考文献方法，并相应改进。正常组 ：无处理，自由饮水 ；模型组 ：灌胃1 % 的盐水 2.5 ml ；麦角甾醇组（35 mg/kg）：灌胃与含有麦角甾醇的等量盐水 ；香豆素组（50 mg/kg）：灌胃与含有香豆素的等量盐水 ；23- 乙酰泽泻醇B组（50mg/kg）：灌胃与含有23- 乙酰泽泻醇 B 的等量盐水 ；氢氯噻嗪组（10mg/kg）：灌胃与含有氢氯噻嗪的等量盐水。每只代谢笼放 1 只大鼠，给药体积为 25 ml/kg， 1 次 /d，连续灌胃给药 8 d，给药第 1 天及第 7 天将大鼠置于代谢笼内收集给药后 6 h 内的尿液，并记录尿液体积 ；第8天给药1h后，按50mg/kg，腹腔注射戊巴比妥钠麻醉后，取肾脏，一份置于液氮罐中速冻后，置 -80℃冰箱保存 ；一份固定保存。检测指标 ：尿量及肾脏 AQP1、AQP2、AQP4 mRNA 和蛋白表达。
Real-time PCR 检 测 AQP1、AQP2 和 AQP4mRNA 的表达，按 Trizol 试剂说明提取细胞总 RNA，采用 MMLV逆转率试剂盒操作说明逆转录 cDNA，在 95 ℃ 10min，95 ℃ 15 s，60 ℃ 1 min，40 cycles 反应条件下进行荧光定量 PCR 反应。结果以 qrGAPDH 为内参，采用 2 -ΔΔCT SD 法进行结果分析，将各组 RQ 值（RQ = 2 -ΔΔCT SD）进行比较。
统计分析 ：使用 Gel-Pro32 软件对结果进行灰度分析 ；实时荧光实验结果采用 2 -ΔΔCT 的数据统计方法。实验数据采用 SPSS 20.0 分析软件进行分析，组间比较采用ANOVA 单因素方差分析，采用 LDS t-test 分析方法进行两两比较，P ＜ 0.05 认为有显著差异，P ＜ 0.01认为有极显著差异。
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