1、上海安亭科学仪器厂介绍静脉血分析需要的材料与方法
实验动物及细胞:小鼠购自武汉大学动物实验中心,隔离盒饲养于动物中心SPF级屏障环境 (感染前)及动物生物安全三级实验室(感染后)中,饲料、水、垫料均经高压灭菌。 小鼠6-8周龄,实验前适应性喂养;实验注射外周血单个核细胞来源于武汉市中心血站中正常人外周血经分离得到的PBMCs。
实验试剂与仪器:人淋巴细胞分离液购自北京索莱宝 科技有限公司;RPMI1640细胞培养液购于Hyclone公司;HIV-1病毒核酸检测荧光PCR法试剂盒购自上海科华生物工程股份有限公司,仪器使用美国ABI7000荧光定量PCR仪;落地式自动平衡离心机由Eppendorf公司生产;上海安亭科学仪器厂高速离心机GL-20B。
上图为上海安亭科学仪器厂生产的
GL-20B高速离心机的产品介绍,最大容量为500mlx6,最高转速为20000转每分钟,自带制冷压缩机,温度为-20~30℃,价格优惠,欢迎咨询采购。
2、利用上海安亭GL-20B高速冷冻离心机分析静脉血的实验方法
离心机对人外周血单核细胞(PBMCs)的分离:血液采自武汉市中心血站随机献血健康人的静脉血,肝素钠抗凝,置于上海安亭GL-20B高速冷冻离心机中设置2500rpm离心15分钟后取出血浆冻存,随后用淋巴细胞分离液密度梯度离心分离出PBMC洗涤两遍后,再用预热RP-MI1640细胞培养液将细胞数调整至2×106个/mL。
移植细胞的准备以及注射:使用RPMI1640培养基悬浮人PBMC细胞至合适的细胞浓度,随后在SPF级屏障环境中,用注射器吸取PBMC细胞悬液分别以腹腔注射和尾静脉注射的方式对NOD/SCID小鼠免疫进行重构。
小鼠的人源化小鼠模型的建立:该部分实验于动物生物 安全三级实验室中完成。 小鼠移植PBMC细胞雌性小鼠共9只分三组,照射后24h内腹腔注射0.5mLPBMC细胞悬液(内含大约5×104细胞);实验II组:3只雌性NOD/SCID小鼠,给予亚致死剂量全身照射。此外将注射0.2mLPBMC细胞悬液的雌性小鼠3只,作为实验对照。
小鼠契合模型的鉴定:小鼠内人源性淋巴细胞检测经移植PBMC细胞的小鼠,分别在2wk、3wk、4wk和10wk时间段内采集鼠眼眶静脉血200uL/只,EDTA抗凝。流式细胞技术,检测存活人淋巴细胞CD45+,CD4+,CD8+比例。严格按说明书要求操作,上机检测。
感染HIV-1HIV-1 IIIB病毒株是X4株的野生型病毒,具有感染外周血单个核细胞的特性。取4只雌性NOD/SCID小鼠,给予亚致死剂量全身照射。 照射后24h内腹腔注射0.5mLPBMC细胞悬液(内含大约5×104细胞),活化三天后,使用预先用 HIVX4病毒株(RT活力单位为20万)感染二天后PBMCs,以腹腔接种方式107/小鼠的剂量对小鼠进行攻毒处理。 第5wk时,小鼠经流式检测结果表明人源性细胞存活并分化出CD45+,CD8+, CD4+细胞的比例。
综上所述,血液的分析离心机是必不可少的设备。