高速冷冻离心机在原料乳测定水杨酸实验中的应用，文中以上海安亭TGL-16aR高速冷冻离心机为例，文中介绍的方法，本方法具有操作简单、重现性好、灵敏度高、杂质干扰小等特点，可以用于原料乳中水杨酸的检测。
1 、试验部分
1.1、仪器：Agilent1260超高效液相色谱仪(美国安捷伦科技有限公司);超声波萃取仪(北京五洲东方);多管涡旋振荡器(北京华威中仪);TGL-16aR冷冻离心机(上海安亭科学仪器厂)。
1.2、试剂与标准品：乙腈(色谱纯，美国 Thermo Fisher 公司);甲醇(色谱纯，美国 Thermo Fisher 公司);磷酸(优级纯，默克，质量分数 85%);氨水(优级纯，国药，质量分数25.0%～28.0%)． 原料乳样品:采集于北京市大型乳企生产用原料乳．水杨酸标准品购自中国食品药品检定研究院．精确称取水杨酸标准品10mg置于10mL棕色容量瓶中，用乙腈溶解并定容，配制成1mg/mL的标准储备溶液，避光、-18℃下保存。用70%乙腈水(体积分数)逐级稀释混合标准溶液，配制成 0．5、1．0、2．0、5．0、10．0、20．0μg/mL的标准溶液系列。磷酸溶液:称取11．5 g 磷酸，精确至 0.01g，加入950mL 水，用氨水调节pH至2.5，加入水1000mL．流动相A液 ( 磷酸水): 量取磷酸溶液200.0mL，并用水稀释至1000mL。流动相B液 ( 磷酸甲醇): 量取磷酸溶液250.0mL，并用甲醇稀释至1000mL 。
2、样品前处理
称2g混匀试样(精确到0.01g)置于10mL刻度离心管中，加入80%乙腈水(体积分数)溶液至5mL刻度线，涡旋30s，超声提取25min，置于上海安亭科学仪器厂TGL-16aR冷冻离心机中以10000r/min在0℃下离心5min，吸取上层提取液1mL，过 0．22μm 微孔滤膜，供检测。
3、 色谱条件
色谱柱:Agilent ZORBAX Eclipse Plus C18(4．6×100 mm，3．5 μm);柱温 25 ℃;二极管阵列检测器(DAD) 300nm;进样体积10μL;流速 0．8mL/min;流动相:A 为磷酸水、B 为磷酸甲醇，梯度洗脱程序:0～3min，A 由 80%线性降到 10%;3～8 min，A 相保持 100%;8～8．1 min，A 由 10%线性升到 80%;8．1～10 min，A 相保持 80%。
4、结果与讨论
4.1、提取溶剂选择：分别用甲醇、乙腈、丙酮、氯仿 4 种有机溶剂对原料乳样品进行提取条件试验(原料乳中水杨酸添加量为 5mg/kg)，试验结果表明:乙腈作为提取溶剂，蛋白沉淀效果最佳，其回收率为93%～105%;丙酮及氯仿虽有一定的提取效果，但回收率较低，均不足 40%;甲醇作为提取试剂，蛋白沉淀效果不佳，个别出现乳化现象，无法达到良好提取兼净化效果． 故选择乙腈作为提取试剂．对于不同浓度的乙腈作为提取试剂对提取效率的影响也做了相应的研究． 选取乙腈质量分数(乙腈 ∶ 水，V ∶ V)分别为 10%、50%、0%、70%、80%、90%、100%的提取试剂，样品中添加水杨酸的质量分为 5mg/kg，进行测试，结果表明乙腈的质量分数大于 60%时，提取效率无明显差异。
4.2、样品净化方法的选择：原料乳中含有大量的蛋白质和脂肪，净化的主要目的就是除去脂肪和沉淀蛋白． 由于乙腈具备良好的沉淀蛋白的效果，对目标物进行提取的同时，可将原料乳中的蛋白质较为充分的沉淀． 冷冻、最后置于TGL-16aR冷冻离心机中高速离心又能有效的避免脂肪的干扰，故为降低检测成本，节约检测时间，没有再额外引入其余净化环节。
以上实验方法仅供大家参考，欢迎大家咨询购买上海安亭科学仪器厂生产的离心机。
