上海安亭科学仪器厂生产的TGL-16aR是一款性价比最好的高速冷冻离心机，最高转速为1.6万转每分钟，是实验室和高校和医院和美容院常用的仪器，文中，介绍TGL-16aR离心机分析口服液人血浆蛋白结合率。
1、 材料
1.1 仪器 :Agilent 1100 高效液相色谱仪，包括脱气机、四元泵、自动进样器、柱温箱、DAD检测器、Chem Station A.10.02色谱工作站（美国Agilent公司）；CPA225D电子天平（德国Sartorius公司）；TGL-16aR冷冻离心机（上海安亭科学仪器厂）；Milli-Q Advantage A10 超纯水机（美国 Millipore公司）；KH5200E型超声波清洗器（昆山禾创超声仪器有限公司）；CentriVap型离心浓缩仪（美国Labconco公司）。
1.2 试药 ：透析袋；病毒灭活冰冻人血浆，对照品去甲异波尔定、柚皮苷、新橙皮苷，成都曼思特生物科技有限公司；四磨汤口服液，湖南汉森制药股份有限公司；甲醇、乙腈为色谱纯，水为超纯水，其余试剂均为分析纯。
2 、方法
2.1 、色谱条件 ，色谱柱：Agilent ZORBAX SB-C 18 柱（150 mm×2.1 mm，5 μm）；流动相：A为乙腈，B为0.1%甲酸溶液，梯度洗脱（0～5min，15%A；5～10min，25%A；10～15min，30%A）；流速：1mL·min -1 ，检测波长：283nm，柱温：35℃，进样量：10μL。
2.2 、溶液的配制
2.2.1 、空白透析液 。精密称取K2HPO4 ·3H2O 18.31g，KHPO4 2.70 g，KCl 11.18g置于1 L烧杯中，超纯水溶解后，转移至1 L容量瓶中，用超纯水洗涤 3次，且洗涤液转移至容量瓶，定容后混匀，得pH7.4 磷酸盐缓冲液（PBS）作为空白透析液 。
2.2.2、标准品溶液 。依次精密称定去甲异波尔定、柚皮苷、新橙皮苷标准品适量，分别置于 1.0 mL 棕色量瓶中，50%甲醇溶解并定容至刻度，制成相应浓度各标准品储备液（去甲异波尔定、新橙皮苷、柚皮苷的浓度分别为 0.93、3.52、1.98 mg·mL -1 ），4 ℃避光保存。分别移取相应的标准品储备液适量，配制成 6个系列浓度的混合标准品溶液（去甲异波尔定、新橙皮苷、柚皮苷的系列浓度分别为 4.50、6.30、8.80、12.30、17.70、24.15 μg·mL -1 ；327.10、457.90、641.10、897.55、1 256.55、1 759.15 μg·mL -1 ；125.25、175.30、245.45、343.60、481.05、673.50 μg·mL -1 ）。
2.2.3 透析外液样品溶液 分别向20mLPBS中加入800、1000、1200μL四磨汤口服液，混匀，得3个浓度的透析外液样品溶液。
2.3 、样品处理
2.3.1 、透析外液样品 吸取透析外液100μL，置于上海安亭科学科学仪器厂离心机TGL-16aR中设置12000r·min -1离心10min，取上清液10μL进样分析。
2.3.2 、透析内液样品处理 精密移取透析内液样品100 μL，加入甲醇400μL，涡旋3min，混匀，置于上海安亭科学仪器厂离心机TGL-16aR中12000 r·min - 1 离心10min；吸取上清 400 μL，40 ℃N2吹干后，用100μL 50%甲醇复溶，涡旋3min，混匀；12000r·min -1离心10 min，取上清液10μL进样分析。
2.3.3 、平衡透析实验 管状透析袋预处理后，一端用棉线结扎，精密吸取1mL人血浆于袋内，袋内保留少量空气，另一端棉线系牢，使其悬浮在盛有 20 mL含四磨汤口服液 PBS 溶液的广口瓶中；调节透析袋内液面高度，使之与外液保持同一水平，避免透析袋贴壁，用封口膜封住瓶口。同法操作9份，置于4 ℃冰箱冷藏平衡。待透析内、外液平衡时，用10 % 高氯酸检查外液是否有蛋白漏出，漏出者作废。
3 、结果
3.1 、方法学考察
3.1.1 、专属性色谱条件下，去甲异波尔定、柚皮苷、新橙皮苷的保留时间分别约为7.97、12.05、12.82min，内源性物质与其他成分对测定无干扰。
3.1.4 提取回收率 精密吸取空白血浆100 μL，配制成低、中、高3种不同质量浓度的质控样品，按操作后，进样分析；另取相应的低、中、高3个不同质量浓度对照品混合液各10μL，40℃N2吹干， 50%甲醇100μL复溶，置于TGL-16aR离心机中以12000r·min -1离心10min；取上清液20uL进样分析，计算提取回收率。
本实验成功建立了HPLC联合平衡透析法测定四磨汤口服液中去甲异波尔定等3种药效成分的血浆蛋白结合率的方法。实验中，比较了甲醇溶液、乙腈溶液沉淀法与乙酸乙酯萃取法及其使用比例。结果 4 倍量的甲醇沉淀时，各分析物提取回收率较高，内源性成分干扰小。平衡透析法的平衡温度一般可选在 37 ℃或 4 ℃条件下测定，本实验结合文献报道选用4℃恒温条件下测定。
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