在RNA的提取实验中多由手工操作。 离心机是本次实验必须要用的设备,还有赛多利斯移液器。文中,上海安亭科学仪器厂就实际操作中的注意事项和大家分享,先分析在实验过程中需要注意的事项。
上海安亭科学仪器厂在文中介绍实验过程需要注意事项,文中所用的离心机是上海安亭TDL-20bR高速冷冻离心机:
(1)采取水泡皮、水泡液、血液 (抗凝血)、血清、组织、细胞培养物和口腔分泌物等样品时,取样的器材必须经高压或者干热灭菌。分离后的样品在2~8℃条件下保存不能超过24h,-70℃可长期保存,但不能反复冻融3次。
(2)除裂解液4℃保存外,氯仿、异丙醇、75%乙醇在-20℃预冷。试验需在生物安全柜中进行,每份样本(1.5ml灭菌离心管)中加入600μl裂解液、200μl待测样本,再加入200μl氯仿,用手颠倒混匀。置于冷冻离心机中于4℃中12000转离心15min。在样品数量较多时,为了避免加样顺序错误,可以使移液头和样品的位置一对应,还可以使离心管的管盖略偏向一边,加完一份样品之后把管盖拨向另一边。
(3)上清液相转移到对应的离心管时,可把离心管略微倾斜,在移液头接触到上清液面后,缓抬持移液器手的拇指,同时将移液器向下深入,当移液头快接触到中间层时停止,眼睛盯住移液头的尖部,如果发现有白色絮状物进入,拇指轻压将其推出,然后停止吸液,这样可以保证吸取液体中不含DNA和蛋白质,所有样品转移完成后切记颠倒混匀。
(4)每一步离心时要注意固定离心管的方向,通常将离心管开口朝向上海安亭离心机转轴方向放置,这样产生的核酸会位于离心管底部靠后的一侧,方便后面吸干残液。
(5)在倒去上清倒置于吸水纸时,吸水纸要有一定的厚度,防止液体渗透到试验台上,污染其他样品,也不要在一张纸上放置过多样品,防止不小心碰倒离心管时,样品互相污染。用微量加样器吸干残液时不要碰倒离心管后部有沉淀的一面,每份样品更换吸头。在室温下干燥时间不宜过长,否则会导致RNA不溶于DEPC水。
(6)实验过程中产生的吸头应直接打入盛有10%次氯酸钠的废物缸内,并与其他废弃物品一同交由处理医疗废弃物的专业人员处理 。工作台及各种实验用品经常用10%次氯酸钠 、75%酒精和紫外灯进行消毒。
以上就是总结的一点经验,以上内容仅供大家参考。